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常见问题 | LONG R3 IGF-I

常见问题 | LONG®R3 IGF-I

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是的,LONG®R3 IGF-I 100mL 和 50mg规格*按cGMP标准生产。生产工厂定期接受欧洲和美国合同制造商和生物制药公司的审计。

*所有产品按 GMP 指南要求生产,但只有用于生产使用的大包装产品有完整的GMP验证。

没有,LONG®R3 IGF-I是一种在 E. coli. 中生产的cGMP级重组蛋白,其专门生产用于哺乳动物细胞培养,生产工艺无动物源性成分。LONG®R3 IGF-I符合法规要求,目前已被用于多种经FDA(美国)、EMEA(欧洲)和MHLW(日本)等批准的生物药的生产。

LONG®R3 IGF-I使用一种专利的传统表达系统生产。从经验证的细胞库获取的细胞以补料分批工艺发酵,使用全面鉴定的无动物成分培养基。然后,从包涵体中分离重组的LONG®R3 IGF-I ,在氧化还原缓冲液中重折叠,并以4步层析工艺进行纯化。

LONG®R3 IGF-I 提供冻干粉和浓度 1mg/mL的 100 mM乙酸液体制剂。

Repligen提供的LONG®R3 IGF-I 冻干粉包括 5 或 50 mg 规格。1 mg/mL的 LONG®R3 IGF-I 液体制剂包括5 mL、100 mL、250mL、500mL 和 1,000mL 规格。

表观、产品一致性(RP-HPLC、质谱)、纯度、生物活性以及生物负荷分析。

冻干的 LONG®R3 IGF-I 使用前必需先复溶。

  1. 产品保存在轻度真空(-25 kPa)的氮气环境中。
  2. 从玻璃瓶上取下金属瓶盖,通过隔片连接一个充满空气的注射器,以平衡压力。
  3. 在小瓶中加入足够量的100 mM乙酸溶液,以达到1 mg/mL的LONG®R3 IGF-I浓度。我们建议保持原液浓度≥ 1 mg/mL。
  4. 充分混合溶液,确保肽完全溶解。
  5. 重悬的 LONG®R3 IGF-I或含有LONG®R3 IGF-I的培养基可使用低蛋白结合膜进行过滤,如孔径 0.22 μm的聚偏二氟乙烯 (PVDF) 或聚醚砜 (PES)。

 液体LONG®R3 IGF-I 即取即用,不需要除霜或复溶。只需打开后,直接稀释到细胞培养基中即可。

研究显示,在过滤过程中,会有小量的LONG®R3 IGF-I损失。下表所示为使用特定类型的膜过滤器时,LONG®R3 IGF-I可能的损失量。

过滤器类型

LONG® R3 IGF-I损失百分比%

0.2 μm 聚醚砜 (PES)

2%

0.1 μm 聚醚砜 (PES)

5%

0.2 μm 聚偏二氟乙烯 (PVDF)

< 1%

0.1 μm 聚偏二氟乙烯 (PVDF)

6%

0.2 μm 醋酸纤维素 (CA)

11%

不能,此类溶液的pH不是最佳的条件,可能导致LONG®R3 IGF-I沉淀。

我们不推荐将粉末溶解在细胞培养基中。

与胰岛素和所有小肽一样,在低蛋白质含量的培养基中,LONG®R3 IGF-I 会非特异性地吸附到塑料、玻璃和不锈钢表面。通常,这种吸附量极低,不会影响细胞培养的整体性能。但是,不正确和不一致的样品操作程序会影响LONG®R3 IGF-I检测的准确性。

为使LONG® R3 IGF-I的非特异性吸附最小化

  • LONG®R3 IGF-I 原液复溶为1 mg/mL或以上。
  • 使用低蛋白质结合的过滤器,如PVDF或PES。
  • 如果可以,在培养基生产工艺尽可能靠后的步骤中添加LONG®R3 IGF-I,推荐直接加到发酵罐内。

冻干的 LONG®R3 IGF-I如果在2-8οC条件下正确储存,可稳定储存5年。液体形式的LONG®R3 IGF-I如果置于原始瓶中不开封,可在 2-8οC条件下稳定储存5年。

冻干的LONG®R3 IGF-I复溶后,或液体形式的LONG®R3 IGF-I开封后,应置于其原始瓶中,盖上盖子,并于 2-8οC储存。

复溶后,溶液可以分装成更小的规格(针对单次使用)并置于LoBind eppendorf小管内,于2-8°C储存。推荐使用LoBind管,以防止蛋白质吸附。在此条件下储存的溶液可使用12个月。

为确保LONG®R3 IGF-I检测的一致性和准确性,我们推荐:

  • 建立标准的细胞培养基样品取样和操作程序。
  • 确定用于处理和储存样品的最佳低蛋白结合管类型。
  • 避免二级取样,以降低重复暴露于表面。
  • 培养基或管中存在载体蛋白时,可提供保护作用,降低非特异性吸附。
  • 分析前,确保所有样品已平衡至室温。

是的,Repligen提供用于确定样品中 LONG®R3 IGF-I浓度的酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒。

了解更多

在CHO细胞培养中,LONG®R3 IGF-I可以提高细胞生长和整体的单位体积产量。此外, LONG®R3 IGF-I可通过降低凋亡,延长培养持续时间,而增强蛋白质生产。

所有有I型IGF受体或对胰岛素敏感的细胞均有可能对LONG®R3 IGF-I有响应。此类细胞包括但不限于大多数商品化使用的细胞系,如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、成纤维细胞、杂交瘤细胞、胚胎干细胞(ES)、天然杀伤细胞(NK)、间充质干细胞(MSC)以及造血干细胞(HSC)。

由于无菌LONG®R3 IGF-I加入细胞培养基时稀释比例较大,所以不会影响pH或渗透压。

LONG®R3 IGF-I的工作浓度范围为 10 - 100 μg/L。我们建议以50 μg/L作为初步试验浓度,然后再进行调节,以根据您的细胞系、工艺和应用,优化浓度。

可以使用直接或逐步适应的方法,使细胞适应含有LONG®R3 IGF-I 的培养基。开始适应过程前,细胞应处于对数生长中期,且活性≥90%。

  1. 直接
    某些克隆可直接在含有适量LONG®R3 IGF-I (通常为 10 - 100 μg/L) 的培养基中生长。
     
  2. 顺序
    某些较不稳健的细胞可能需要逐步适应新的培养基。比如开始培养时,可以使用含和不含LONG® R3 IGF-I的培养基比例为25%:75%的混合液。当细胞活性>90%,且细胞倍增时间稳定时,将培养基置换为新的混合液(如 50%:50%)。如生长变缓或活性下降,细胞应在相同的培养基中继续传代,直到活性和倍增时间稳定。

步骤

%起始培养基

%含LONG®R3IGF-I培养基

进入下一步的标准

1

75

25

活性≥90%,稳定的细胞倍增时间

2

50

50

3

25

75

4

0

100

LONG®R3 IGF-I 和胰岛素的联合使用可能对某些细胞系有益。我们建议根据不同的细胞系、应用和工艺,对LONG®R3 IGF-I 的用量进行优化。

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LONG®R3 IGF-I 未经批准或允许于人体使用。Repligen仅向明确表示用于细胞培养添加或研究目的的客户提供 LONG®R3 IGF-I 。