常见问题 | LONG R3 IGF-I

是的，LONG^®R3 IGF-I 100mL 和 50mg规格*按cGMP标准生产。生产工厂定期接受欧洲和美国合同制造商和生物制药公司的审计。

_{*所有产品按 GMP 指南要求生产，但只有用于生产使用的大包装产品有完整的GMP验证。}

没有，LONG^®R3 IGF-I是一种在 E. coli. 中生产的cGMP级重组蛋白，其专门生产用于哺乳动物细胞培养，生产工艺无动物源性成分。LONG^®R3 IGF-I符合法规要求，目前已被用于多种经FDA（美国）、EMEA（欧洲）和MHLW（日本）等批准的生物药的生产。

LONG^®R³ IGF-I使用一种专利的传统表达系统生产。从经验证的细胞库获取的细胞以补料分批工艺发酵，使用全面鉴定的无动物成分培养基。然后，从包涵体中分离重组的LONG^®R³ IGF-I ，在氧化还原缓冲液中重折叠，并以4步层析工艺进行纯化。

LONG^®R³ IGF-I 提供冻干粉和浓度 1mg/mL的 100 mM乙酸液体制剂。

Repligen提供的LONG^®R3 IGF-I 冻干粉包括 5 或 50 mg 规格。1 mg/mL的 LONG^®R3 IGF-I 液体制剂包括5 mL、100 mL、250mL、500mL 和 1,000mL 规格。

表观、产品一致性（RP-HPLC、质谱）、纯度、生物活性以及生物负荷分析。

冻干的 LONG^®R³ IGF-I 使用前必需先复溶。

1. 产品保存在轻度真空(-25 kPa)的氮气环境中。
2. 从玻璃瓶上取下金属瓶盖，通过隔片连接一个充满空气的注射器，以平衡压力。
3. 在小瓶中加入足够量的100 mM乙酸溶液，以达到1 mg/mL的LONG^®R³ IGF-I浓度。我们建议保持原液浓度≥ 1 mg/mL。
4. 充分混合溶液，确保肽完全溶解。
5. 重悬的 LONG^®R³ IGF-I或含有LONG^®R³ IGF-I的培养基可使用低蛋白结合膜进行过滤，如孔径 0.22 μm的聚偏二氟乙烯 (PVDF) 或聚醚砜 (PES)。

 液体LONG^®R³ IGF-I 即取即用，不需要除霜或复溶。只需打开后，直接稀释到细胞培养基中即可。

研究显示，在过滤过程中，会有小量的LONG^®R³ IGF-I损失。下表所示为使用特定类型的膜过滤器时，LONG^®R³ IGF-I可能的损失量。

不能，此类溶液的pH不是最佳的条件，可能导致LONG^®R³ IGF-I沉淀。

我们不推荐将粉末溶解在细胞培养基中。

与胰岛素和所有小肽一样，在低蛋白质含量的培养基中，LONG^®R³ IGF-I 会非特异性地吸附到塑料、玻璃和不锈钢表面。通常，这种吸附量极低，不会影响细胞培养的整体性能。但是，不正确和不一致的样品操作程序会影响LONG^®R³ IGF-I检测的准确性。

为使LONG^® R³ IGF-I的非特异性吸附最小化

• LONG^®R³ IGF-I 原液复溶为1 mg/mL或以上。
• 使用低蛋白质结合的过滤器，如PVDF或PES。
• 如果可以，在培养基生产工艺尽可能靠后的步骤中添加LONG^®R³ IGF-I，推荐直接加到发酵罐内。

冻干的 LONG^®R³ IGF-I如果在2-8^οC条件下正确储存，可稳定储存5年。液体形式的LONG^®R³ IGF-I如果置于原始瓶中不开封，可在 2-8^οC条件下稳定储存5年。

冻干的LONG^®R³ IGF-I复溶后，或液体形式的LONG^®R³ IGF-I开封后，应置于其原始瓶中，盖上盖子，并于 2-8^οC储存。

复溶后，溶液可以分装成更小的规格（针对单次使用）并置于LoBind eppendorf小管内，于2-8°C储存。推荐使用LoBind管，以防止蛋白质吸附。在此条件下储存的溶液可使用12个月。

为确保LONG^®R³ IGF-I检测的一致性和准确性，我们推荐：

• 建立标准的细胞培养基样品取样和操作程序。
• 确定用于处理和储存样品的最佳低蛋白结合管类型。
• 避免二级取样，以降低重复暴露于表面。
• 培养基或管中存在载体蛋白时，可提供保护作用，降低非特异性吸附。
• 分析前，确保所有样品已平衡至室温。

是的，Repligen提供用于确定样品中 LONG^®R³ IGF-I浓度的酶联免疫吸附分析（ELISA）试剂盒。

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在CHO细胞培养中，LONG^®R³ IGF-I可以提高细胞生长和整体的单位体积产量。此外， LONG^®R³ IGF-I可通过降低凋亡，延长培养持续时间，而增强蛋白质生产。

所有有I型IGF受体或对胰岛素敏感的细胞均有可能对LONG^®R³ IGF-I有响应。此类细胞包括但不限于大多数商品化使用的细胞系，如中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、成纤维细胞、杂交瘤细胞、胚胎干细胞（ES）、天然杀伤细胞（NK）、间充质干细胞（MSC）以及造血干细胞（HSC）。

由于无菌LONG^®R³ IGF-I加入细胞培养基时稀释比例较大，所以不会影响pH或渗透压。

LONG^®R³ IGF-I的工作浓度范围为 10 - 100 μg/L。我们建议以50 μg/L作为初步试验浓度，然后再进行调节，以根据您的细胞系、工艺和应用，优化浓度。

可以使用直接或逐步适应的方法，使细胞适应含有LONG^®R³ IGF-I 的培养基。开始适应过程前，细胞应处于对数生长中期，且活性≥90%。

1. 直接
   某些克隆可直接在含有适量LONG^®R³ IGF-I (通常为 10 - 100 μg/L) 的培养基中生长。
    
2. 顺序
   某些较不稳健的细胞可能需要逐步适应新的培养基。比如开始培养时，可以使用含和不含LONG® R³ IGF-I的培养基比例为25%:75%的混合液。当细胞活性>90%，且细胞倍增时间稳定时，将培养基置换为新的混合液（如 50%:50%）。如生长变缓或活性下降，细胞应在相同的培养基中继续传代，直到活性和倍增时间稳定。

LONG^®R³ IGF-I 和胰岛素的联合使用可能对某些细胞系有益。我们建议根据不同的细胞系、应用和工艺，对LONG^®R³ IGF-I 的用量进行优化。

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