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每种类型的膜对不同的分子表现出不同的亲和性。对于球蛋白,相对结合亲和性为CE <RC <PVDF。
标准级RC膜 (Spectra/Por® 1-7) 和生物技术级RC采用柔软的再生纤维素聚合物制造,可以使用任何类型的透析膜夹密封。生物技术级CE和PVDF采用更为刚性的聚合物制造,需要使用更为温和的通用膜夹,因其适用于所有类型的透析膜管,当对膜夹选择有疑问时,可选择使用通用膜夹。标准膜夹仅可用于标准级RC透析膜管。
建议膜夹密封宽度比透析膜管扁平宽度长4-10 mm。最小的通用膜夹的密封宽度为50 mm。这可密封我们所有扁平宽度规格的生物技术级膜管。
干型包装透析膜的保质期为 5 年。湿型包装 (0.05% 叠氮化钠溶液) 膜的保质期为 3 年。辐照膜的保质期为 1.5 年。
如果润湿后的膜变干,会对孔径造成不利影响,膜会变脆,且可能泄漏。此时膜应丢弃。
如果膜冻结,冰晶可能会使膜破裂并导致泄漏。建议不要使用该膜。但是,您可以尝试缓慢升高温度,直到存储溶液完全融化。但膜不再完整的可能性仍然存在。
不。Repligen生产供实验室使用的透析膜。
只要膜是完整的,膜上的卷痕或折线就不会影响扩散性能。
纤维素酯(CE)膜中的聚合物交联形成更为刚性的分子晶格,而再生纤维素(RC)聚合物则形成更柔韧的晶格结构。不透明是由于更为刚性的框架中的膜孔所导致的。孔径越大,膜越不透明。
CE和RC透析膜只可以机械密封。但是,PVDF透析膜可机械密封或热密封,且出于样品“包封”目的时,通常使用热密封方式。
我们不建议重复使用透析膜,因其可能会因操作而被污染,且透析条件(pH、温度、化学暴露等)可能会改变膜的完整性和/或引起泄漏,特别是在取下和重新夹上膜夹时。透析膜设计为一次性使用。
由于透析膜由海绵状基质组成,因此通过评估其截留分子量(MWCO)为特征的截留性能,而间接测量其“孔径”更为合适和实用。 MWCO定义为17小时内被膜截留90%的溶质的分子量。因此,您应该选择MWCO刚好小于您要截留的溶质的大小的膜。
Spectra/Por® 2 和 4 均提供MWCO 12-14 kD规格。 Spectra/Por® 4 更适合常规透析应用,而Spectra/Por® 2 可提供更高或更低的扁平宽度和/或更高的渗透性;亦即,Spectra/Por® 2 的水渗透性较Spectra/Por® 4更为出色。
表面积与体积之比与膜管扁平宽度有关。如果您有两段长度相等的膜管,而其扁平宽度不同,扁平宽度较小的膜管具有较高的表面积与体积之比,透析速度更快,而扁平宽度较大的膜管具有较低的表面积与体积之比,透析速度较慢。较小的扁平宽度具有较短的扩散距离,且溶质通过膜孔的竞争更低。扁平宽度较大时,分子与膜壁的距离更长,溶质通过膜孔的竞争也更高。通常,表面积与体积之比越大,透析越快。
大多数透析是在没有跨膜渗透压的情况下进行的。透析过程由透析膜管内部和外部的浓度梯度所驱动。如果渗透压差异很大,水将流过膜。如果过多的水透过膜迁移,则透析膜管可能会破裂或塌陷,具体取决于水迁移的方向。
透析膜不是针对压力过滤而设计的。在不影响MWCO的前提下,建议的最大压力为1.5 psi。
生物分子必须保持在严格的pH值控制条件下才能稳定其分子特性。透析缓冲液的典型pH范围是6至8 。以下是生物分子溶液常见的一些溶液/缓冲液:
尽管溶解的分子的大小由以道尔顿为单位的分子量(MW)单位定义,但颗粒和细胞的大小由公制直径定义,因为MW单位不太实用,且没有考虑微观范围内的形状。由于微米是2维距离的量度,而道尔顿是3维尺寸的量度(基于原子量单位),因此两者之间没有从一个到另一个的直接转换方式。由于这个原因,对许多常见的生物材料都针对透析、超滤和微滤目的进行了表征,并绘制在转换图上,以关联近似比例,作为估算转换的参考。有关道尔顿和公制单位之间进行转换的信息,请参阅我们网站上的孔径对照表。
如果可能,我们建议在低盐浓度的缓冲液中进行透析。不建议在纯去离子水中进行透析,因为这会导致渗透压将水吸入膜管,使膜管膨胀,并可能使膜破裂。使用溶质(盐)浓度逐步降低的一系列缓冲液,进行连续透析,可防止渗透压导致膜溶胀。尝试在每次更换缓冲液时,使溶质浓度的数量级之比为10:1 。例如,含有5 M NaCl的样品使用500 mM NaCl缓冲液进行透析。
我们强烈建议不要在膜管上打绳结。绳结不能有效地防止泄漏。只有透析膜夹才能为样品的安全透析提供足够的密封。
除了每种膜管的扁平宽度外,Repligen还列出了相关的体积/长度比,可用于计算容纳样品量所需的膜管长度。例如,如果扁平宽度为16 mm,则体积/长度比为 0.79 ml/cm。要容纳5 ml的样品,您需要大约 6.5 cm的长度。但是,您还需要增加大约10至20 %(至少为1 cm)的长度,以留出顶部空间(空气),以使样品保持漂浮状态。最后,您还需要在两端留出足够的长度,大约2 cm,以允许使用膜夹密封。膜管总长度将至少为11.5 cm。计算所需膜管长度的简单公式如下:
总长度=(样品体积)/(体积/长度)+(额外的10 - 20 %)+ 4 cm