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MabSelect SuRe ELISA试剂盒性能总结

技术笔记

MabSelect SuRe™ ELISA 试剂盒性能总结

简介

Protein A ELISA 试剂盒 (产品编号 9333-1) 适用于对残留的MabSelect SuRe™ 配基进行检测和定量。我们的Protein A ELISA试剂盒是为需要对抗体产品中的少量污染性MabSelect SuRe™配基进行高灵敏度检测分析的客户而开发的。污染物的检测会在产品开发和商业化生产的多个不同阶段进行,其中包括:

  • 在特定条件下,针对填料配基脱落特性的工艺开发
  • 生产,通常需对纯化工艺中多个不同点采集的洗脱样品进行分析
  • 终产品放行时文件记录工艺污染物水平和批次间的一致性

以下总结报告包括了在存在人免疫球蛋白G(hIgG)的情况下,从Protein A ELISA试剂盒的评估实验中收集的性能数据。此处数据证实Protein A ELISA试剂盒:

  • 能够在PBS-T缓冲液中存在高达0.5 mg/ml hIgG时进行MabSelect SuRe™ 配基检测
  • 回收率(准确性)、分析间和分析内精确性、定量限和检测限
PROTEIN A ELISA试剂盒,用于MabSelect SuRe™ 配基
结果总结

存在hIgG的MabSelect SuRe™

研究评估了Protein A ELISA试剂盒的性能,即相比不含hIgG的标准品,对含有hIgG的样品中的MabSelect SuRe™配基进行检测。所有加标样品的最终hIgG浓度均为 0.125 mg/ml(最终稀释液加入分析板后)。每个加标样品均制备8个重复,按照试剂盒的标准方案进行三次独立的ELISA实验。

数据处理

标准曲线数据点拟合至4参数拟合分析。该方程式允许对样品rPA浓度进行反算并计算LoQ值。回收率计算如下: 

 data-handling.png

分析内精确性

表1. 标准曲线样品的分析内精确性

浓度 (ng/ml) 平均 % CV
1.6 5.1
0.8 2.3
0.4 3.3
0.2 4.0
0.1 5.2
0.05 7.5

 

表2.含hlgG样品的分析内精确性

浓度 (ng/ml) 计算的
浓度
平均 % CV
1.2 1.25 6.1
1.0 1.01 5.3
0.8 0.76 4.1
0.6 0.64 4.9
0.4 0.37 5.4
0.2 0.18 7.7
0.1 0.09 11.0
0.05 0.05 18.0

 

分析间精确性

表3. 标准曲线样品的分析间精确性

浓度 (ng/ml) 平均 % CV
1.6 0.1
0.8 0.2
0.4 0.8
0.2 1.6
0.1 2.1
0.05 2.7

 

表4.含hlgG样品的分析间精确性

浓度 (ng/ml) 计算的
浓度
平均 % CV
1.2 1.25 7.6
1.0 1.01 0.9
0.8 0.76 2.6
0.6 0.64 8.6
0.4 0.37 6.3
0.2 0.18 13.0
0.1 0.09 10.4
0.05 0.05 9.0

 

准确性

表5.标准曲线样本的准确性

浓度 (ng/ml) 平均 % 误差 平均%回收率
1.6 0.0 100
0.8 0.4 100
0.4 -0.7 99
0.2 -1.3 99
0.1 2.1 102
0.05 7.3 107

 

表6.含hlgG样品的准确性

浓度 (ng/ml) 计算的
浓度
平均 % 误差 平均%回收率
1.2 1.25 3.8 104
1.0 1.01 1.2 101
0.8 0.76 -4.5 96
0.6 0.64 5.9 106
0.4 0.37 -8.2 92
0.2 0.18 -8.0 92
0.1 0.09 -8.8 91
0.05 0.05 -7.8 92

 

定量限(LoQ)

由标准曲线测定的LoQ为0.025ng/ml。存在hIgG的MabSelect SuRe™ 加标样品的LoQ为 0.115 ng/ml 或 0.920 ng/mg (0.92 ppm)。基于该数据,在免疫球蛋白存在的情况下,试剂盒检测MabSelect SuRe™ 配基的灵敏度设定为 < 1 ppm。

稀释线性

图 1.稀释曲线的线性显示了在整个检测的MabSelect SuRe™ 配基浓度范围内准确性的高度相关性。

linearity-of-dilutions-samples-with-higG.png

 

结论

分析内数据表明,三种检测的精确性在可接受的参数范围内,标准品的%CV值范围为2.3-7.5 %。这组实验具有标准LoQ 0.025 ng/ml。

分析内数据表明,以相对的准确性和精确性对含有hIgG的样品进行了检测,%CV值为 11.0-4.1%。计算的样本LoQ为0.115 ng/ml。以%相对误差衡量的准确性为标准品7.3 - -1.3,样品 -8.8 - 5.9。

分析间数据具有相似的结果。对于所有浓度,标准曲线样品之间的CV%低于2.7,证实了三种检测方法的精确性。含有hIgG的样品具有很高的精确性,对于高于LoQ的浓度,%CV值范围为 13.0-0.9%。

计算说明

精确性 (%CV)

通过确定rPA加标样品数据点之间的标准偏差并除以平均值来计算精确性。根据“行业指南:生物分析方法验证”内容,精确性应在15 %以内。

分析内精确性

通过将所有分析中的%CV值取平均值,可以计算出每个rPA加标样品浓度的分析内精确性。

分析间精确性

通过确定三次分析中每次计算结果之间的标准偏差,然后除以平均值,可以计算出每个浓度点的分析间精确性。

定量限(LoQ)

定量限(LoQ)定义为10乘以0 ng/ml样品的标准偏差。将0 ng/ml OD值的标准偏差乘以10然后加到基本0 ng/ml OD值。然后通过将求和值输入标准曲线4 -参数拟合方程式来生成LoQ。对于每个试剂盒,LoQ均报告为每毫升缓冲液中的ng Protein A(ng/ml),在hIgG存在的情况下,rPA加标样品的ng Protein A / mg hIgG(ppm)。

检测限 (LoD)

检测限(LoD)定义为3乘以0 ng/ml Protein A样品的
标准偏差。将0 ng/ml OD值的标准偏差乘以3然后加到基本0 ng/ml OD值。通过将求和值输入标准曲线4 -参数拟合方程式来生成LoD。对于每种试剂盒,LoD均以每毫升缓冲液的ng Protein A(ng/ml)以及百万分之一(ppm)报告。

准确性

准确性描述为与理论加标浓度相比,分析确定的回收率%

 

 

MabSelect™、MabSelect SuRe™和SuRe™为GE Healthcare注册商标。