MabSelect SuRe™ ELISA 试剂盒性能总结
INTRODUCTION
Protein A ELISA 试剂盒 (产品编号 9333-1) 适用于对残留的MabSelect SuRe™ 配基进行检测和定量。我们的Protein A ELISA试剂盒是为需要对抗体产品中的少量污染性MabSelect SuRe™配基进行高灵敏度检测分析的客户而开发的。污染物的检测会在产品开发和商业化生产的多个不同阶段进行，其中包括：
- 在特定条件下，针对填料配基脱落特性的工艺开发
- 生产，通常需对纯化工艺中多个不同点采集的洗脱样品进行分析
- 终产品放行时文件记录工艺污染物水平和批次间的一致性
以下总结报告包括了在存在人免疫球蛋白G（hIgG）的情况下，从Protein A ELISA试剂盒的评估实验中收集的性能数据。此处数据证实Protein A ELISA试剂盒：
- 能够在PBS-T缓冲液中存在高达0.5 mg/ml hIgG时进行MabSelect SuRe™ 配基检测
- 回收率（准确性）、分析间和分析内精确性、定量限和检测限
RESULTS SUMMARY
存在hIgG的MabSelect SuRe™
研究评估了Protein A ELISA试剂盒的性能，即相比不含hIgG的标准品，对含有hIgG的样品中的MabSelect SuRe™配基进行检测。所有加标样品的最终hIgG浓度均为 0.125 mg/ml（最终稀释液加入分析板后）。每个加标样品均制备8个重复，按照试剂盒的标准方案进行三次独立的ELISA实验。
数据处理
标准曲线数据点拟合至4参数拟合分析。该方程式允许对样品rPA浓度进行反算并计算LoQ值。回收率计算如下：
分析内精确性
表1. 标准曲线样品的分析内精确性
| 浓度 (ng/ml) | 平均 % CV |
|---|---|
| 1.6 | 5.1 |
| 0.8 | 2.3 |
| 0.4 | 3.3 |
| 0.2 | 4.0 |
| 0.1 | 5.2 |
| 0.05 | 7.5 |
表2.含hlgG样品的分析内精确性
| 浓度 (ng/ml) | 计算的 浓度 |
平均 % CV |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 6.1 |
| 1.0 | 1.01 | 5.3 |
| 0.8 | 0.76 | 4.1 |
| 0.6 | 0.64 | 4.9 |
| 0.4 | 0.37 | 5.4 |
| 0.2 | 0.18 | 7.7 |
| 0.1 | 0.09 | 11.0 |
| 0.05 | 0.05 | 18.0 |
分析间精确性
表3. 标准曲线样品的分析间精确性
| 浓度 (ng/ml) | 平均 % CV |
|---|---|
| 1.6 | 0.1 |
| 0.8 | 0.2 |
| 0.4 | 0.8 |
| 0.2 | 1.6 |
| 0.1 | 2.1 |
| 0.05 | 2.7 |
表4.含hlgG样品的分析间精确性
| 浓度 (ng/ml) | 计算的 浓度 |
平均 % CV |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 7.6 |
| 1.0 | 1.01 | 0.9 |
| 0.8 | 0.76 | 2.6 |
| 0.6 | 0.64 | 8.6 |
| 0.4 | 0.37 | 6.3 |
| 0.2 | 0.18 | 13.0 |
| 0.1 | 0.09 | 10.4 |
| 0.05 | 0.05 | 9.0 |
准确性
表5.标准曲线样本的准确性
| 浓度 (ng/ml) | 平均 % 误差 | 平均%回收率 |
|---|---|---|
| 1.6 | 0.0 | 100 |
| 0.8 | 0.4 | 100 |
| 0.4 | -0.7 | 99 |
| 0.2 | -1.3 | 99 |
| 0.1 | 2.1 | 102 |
| 0.05 | 7.3 | 107 |
表6.含hlgG样品的准确性
| 浓度 (ng/ml) | 计算的 浓度 |
平均 % 误差 | 平均%回收率 |
|---|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 3.8 | 104 |
| 1.0 | 1.01 | 1.2 | 101 |
| 0.8 | 0.76 | -4.5 | 96 |
| 0.6 | 0.64 | 5.9 | 106 |
| 0.4 | 0.37 | -8.2 | 92 |
| 0.2 | 0.18 | -8.0 | 92 |
| 0.1 | 0.09 | -8.8 | 91 |
| 0.05 | 0.05 | -7.8 | 92 |
定量限（LoQ）
由标准曲线测定的LoQ为0.025ng/ml。存在hIgG的MabSelect SuRe™ 加标样品的LoQ为 0.115 ng/ml 或 0.920 ng/mg (0.92 ppm)。基于该数据，在免疫球蛋白存在的情况下，试剂盒检测MabSelect SuRe™ 配基的灵敏度设定为 < 1 ppm。
稀释线性
图 1.稀释曲线的线性显示了在整个检测的MabSelect SuRe™ 配基浓度范围内准确性的高度相关性。
CONCLUSIONS
分析内数据表明，三种检测的精确性在可接受的参数范围内，标准品的％CV值范围为2.3-7.5 %。这组实验具有标准LoQ 0.025 ng/ml。
分析内数据表明，以相对的准确性和精确性对含有hIgG的样品进行了检测，％CV值为 11.0-4.1%。计算的样本LoQ为0.115 ng/ml。以％相对误差衡量的准确性为标准品7.3 - -1.3，样品 -8.8 - 5.9。
分析间数据具有相似的结果。对于所有浓度，标准曲线样品之间的CV％低于2.7，证实了三种检测方法的精确性。含有hIgG的样品具有很高的精确性，对于高于LoQ的浓度，％CV值范围为 13.0-0.9%。
计算说明
精确性 (%CV)
通过确定rPA加标样品数据点之间的标准偏差并除以平均值来计算精确性。根据“行业指南：生物分析方法验证”内容，精确性应在15 %以内。
分析内精确性
通过将所有分析中的％CV值取平均值，可以计算出每个rPA加标样品浓度的分析内精确性。
分析间精确性
通过确定三次分析中每次计算结果之间的标准偏差，然后除以平均值，可以计算出每个浓度点的分析间精确性。
定量限（LoQ）
定量限（LoQ）定义为10乘以0 ng/ml样品的标准偏差。将0 ng/ml OD值的标准偏差乘以10然后加到基本0 ng/ml OD值。然后通过将求和值输入标准曲线4 -参数拟合方程式来生成LoQ。对于每个试剂盒，LoQ均报告为每毫升缓冲液中的ng Protein A（ng/ml），在hIgG存在的情况下，rPA加标样品的ng Protein A / mg hIgG（ppm）。
检测限 (LoD)
检测限（LoD）定义为3乘以0 ng/ml Protein A样品的
标准偏差。将0 ng/ml OD值的标准偏差乘以3然后加到基本0 ng/ml OD值。通过将求和值输入标准曲线4 -参数拟合方程式来生成LoD。对于每种试剂盒，LoD均以每毫升缓冲液的ng Protein A（ng/ml）以及百万分之一（ppm）报告。
准确性
准确性描述为与理论加标浓度相比，分析确定的回收率%
MabSelect™、MabSelect SuRe™和SuRe™为GE Healthcare注册商标。