Protein A ELISA 试剂盒性能总结
INTRODUCTION
Protein A ELISA 试剂盒 (产品编号 9000-1) 适用于对残留的天然和重组Protein A (rPA)进行检测和定量。我们的Protein A ELISA试剂盒是为需要对抗体产品中的少量污染性Protein A进行高灵敏度检测分析的客户而开发的。Protein A污染物的检测会在产品开发和商业化生产的多个不同阶段进行，其中包括：
- 在特定条件下，针对填料配基脱落特性的工艺开发
- 生产，通常需对纯化工艺中多个不同点采集的洗脱样品进行分析
- 终产品放行时文件记录工艺污染物水平和批次间的一致性
以下总结报告包括了在存在人免疫球蛋白G（hIgG）的情况下，从Protein A ELISA试剂盒的评估实验中收集的性能数据。此处数据证实Protein A ELISA试剂盒：
- 能够在PBS-T缓冲液中存在高达0.5 mg/ml hIgG时进行rPA检测
- 回收率（准确性）、分析间和分析内精确性、定量限和检测限
RESULTS SUMMARY
存在hIgG的rPA
研究评估了Protein A ELISA试剂盒的性能，即相比不含hIgG的标准品，对含有hIgG的样品中的rPA的检测。所有rPA加标样品的最终hIgG浓度均为 0.125 mg/ml（最终稀释液加入分析板后）。每个加标样品均制备8个重复，按照试剂盒的标准方案进行三次独立的ELISA实验。
数据处理
标准曲线数据点拟合至4参数拟合分析。该方程式允许对样品rPA浓度进行反算并计算LoQ值。回收率计算如下：
分析内精确性
表1.标准曲线样品的分析内精确性（无hlgG）
| 浓度 (ng/ml) | 平均 % CV |
|---|---|
| 1.6 | 3.7 |
| 0.8 | 3.5 |
| 0.4 | 4.7 |
| 0.2 | 6.8 |
| 0.1 | 4.6 |
| 0.05 | 8.6 |
表2.含hlgG样品的分析内精确性
| 浓度 (ng/ml) | 计算的 浓度 |
平均 % CV |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.08 | 3.9 |
| 1.0 | 0.91 | 3.5 |
| 0.8 | 0.74 | 2.6 |
| 0.6 | 0.54 | 3.9 |
| 0.4 | 0.35 | 3.4 |
| 0.2 | 0.19 | 8.7 |
| 0.1 | 0.11 | 10.4 |
| 0.05 | 0.06 | 17.7 |
分析间精确性
表3.标准曲线样品的分析间精确性（无hlgG）
| 浓度 (ng/ml) | 平均 % CV |
|---|---|
| 1.6 | 3.3 |
| 0.8 | 3.2 |
| 0.4 | 4.9 |
| 0.2 | 1.6 |
| 0.1 | 4.1 |
| 0.05 | 2.1 |
表4.含hlgG样品的分析间精确性
| 浓度 (ng/ml) | 计算的 浓度 |
平均 % CV |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.08 | 1.3 |
| 1.0 | 0.91 | 0.9 |
| 0.8 | 0.74 | 0.8 |
| 0.6 | 0.54 | 0.4 |
| 0.4 | 0.35 | 1.0 |
| 0.2 | 0.19 | 3.1 |
| 0.1 | 0.11 | 4.9 |
| 0.05 | 0.06 | 5.1 |
准确性
表5.标准曲线样本的准确性
| 浓度 (ng/ml) | 平均%回收率 |
|---|---|
| 1.6 | 100 |
| 0.8 | 100 |
| 0.4 | 100 |
| 0.2 | 101 |
| 0.1 | 101 |
| 0.05 | 93 |
表6.含hlgG样品的准确性
| 浓度 (ng/ml) | 计算的 浓度 |
平均%回收率 |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.08 | 90 |
| 1.0 | 0.91 | 91 |
| 0.8 | 0.74 | 92 |
| 0.6 | 0.54 | 90 |
| 0.4 | 0.35 | 87 |
| 0.2 | 0.19 | 93 |
| 0.1 | 0.11 | 106 |
| 0.05 | 0.06 | 125 |
定量限（LoQ）
标准曲线测定的LoQ为0.037ng/ml。存在hIgG的rPA加标样品的LoQ为 0.102 ng/ml 或 0.82 ng/mg (0.82ppm)。在免疫球蛋白存在的情况下，试剂盒检测rPA50配基的灵敏度< 1 ppm 或 0.1 ng/mL。
稀释线性
Figure 1.
稀释曲线的线性显示了在整个检测的浓度范围内准确性的高度相关性。
CONCLUSIONS
分析间数据表明，标准曲线样品的精确性在可接受的范围内，% CV值在 3.5-8.6%之间。标准曲线测定的LoQ为0.037 ng/ml。
分析内数据表明，样品的分析具有相对的准确性和精确性。样品的LoQ计算为0.102 ng/ml。(Protein A ELISA试剂盒的灵敏度为0.1 ng/ml)。等于或高于这一限值的所有样品浓度的%CV值为 10.4-2.6%，低于15%的限值。
以平均回收率％衡量的准确性为标准品93-101％，样品90-125％。
分析间数据表明该数据是可重复的。所有标准浓度的分析间变异系数低于或等于4.9%。样品具有很高的分析间精确性，对于等于或高于LoQ的浓度，％CV值在 5.1-0.4%范围内。
EXPLANATION OF CALCULATIONS
精确性 (%CV)
通过确定rPA加标样品数据点之间的标准偏差并除以平均值来计算精确性。根据“行业指南：生物分析方法验证”内容，精确性应在15 %以内。
分析内精确性
通过将所有分析中的％CV值取平均值，可以计算出每个rPA加标样品浓度的分析内精确性。
分析间精确性
通过确定三次分析中每次计算结果之间的标准偏差，然后除以平均值，可以计算出每个浓度点的分析间精确性。
定量限（LoQ）
定量限（LoQ）定义为10乘以0 ng/ml样品的标准偏差。将0 ng/ml OD值的标准偏差乘以10然后加到基本0 ng/ml OD值。然后通过将求和值输入标准曲线4 -参数拟合方程式来生成LoQ。对于每个试剂盒，LoQ均报告为每毫升缓冲液中的ng Protein A（ng/ml），在hIgG存在的情况下，rPA加标样品的ng Protein A / mg hIgG（ppm）。
检测限 (LoD)
定量限（LoQ）定义为3乘以0 ng/ml样品的标准偏差。将0 ng/ml OD值的标准偏差乘以3然后加到基本0 ng/ml OD值。然后通过将求和值输入标准曲线4 -参数拟合方程式来生成LoQ。对于每个试剂盒，LoQ均以每毫升缓冲液的ng Protein A（ng/ml）以及百万分之一（ppm）报告。
准确性
准确度描述为与理论加标浓度相比，分析确定的回收率%