透析是溶解的溶质在浓度梯度的驱动下，穿过选择性半透膜，以达到平衡的过程。小于膜孔的溶质穿过膜，而较大的溶质被截留在另一侧。

通过更换膜外侧的透析缓冲液，您可以连续去除较小的溶质，从而纯化被截留的大分子。通常，一天内多次更换缓冲液，并在室温条件下，置于搅拌器上过夜，透析的效率最高。透析的标准方案是16至24小时。影响透析速率的因素很多，包括：扩散系数、pH、温度、时间、物质浓度、样品量、透析液（缓冲液）体积、透析液更换次数、膜表面积、膜厚度、分子电荷和透析液搅拌。

透析液体积越大，小分子扩散的驱动力越大。我们通常建议缓冲液和样品体积之比为 100:1 。通过在扩散速度减慢且溶液接近平衡时更换缓冲液，可以保持驱动力和透析速度。我们一般建议在12 - 24小时内更换两或三次缓冲液，如下所示：

• 第一次缓冲液更换： 2-3 小时之后
• 第二次缓冲液置换： 4-5 小时之后
• 最后一次缓冲液更换：放置过夜之前。

MWCO应选择尽可能高，以使透析速率最大化。但是，为了获得更高的样品回收率，您可以选择约为需要截留的大分子分子量一半的MWCO规格。对于需要分离分子的应用，两种物质的分子量之间必须至少有一个5 倍的差异才能使膜透析有效。否则，您可能需要其它的分离技术，比如层析或TFF过滤。

每种类型的膜对不同的分子表现出不同的亲和性。对于球蛋白，相对结合亲和性为CE <RC <PVDF。

Standard RC membrane (Spectra/Por^® 1-7) and Biotech RC is constructed of flexible regenerated cellulose polymers and can be sealed using any of the dialysis tubing closures. Biotech CE and PVDF are constructed of a more rigid polymer requiring gentler Universal closures. Since these work well for all dialysis tubing; when in doubt, use Universal Closures. Standard Closures should ONLY be used with Standard RC tubing. 

建议膜夹密封宽度比透析膜管扁平宽度长4-10 mm。最小的通用膜夹的密封宽度为50 mm。这可密封我们所有扁平宽度规格的生物技术级膜管。 

干型包装透析膜的保质期为 5 年。湿型包装 (0.05% 叠氮化钠溶液) 膜的保质期为 3 年。辐照膜的保质期为 1.5 年。 

如果润湿后的膜变干，会对孔径造成不利影响，膜会变脆，且可能泄漏。此时膜应丢弃。 

如果膜冻结，冰晶可能会使膜破裂并导致泄漏。建议不要使用该膜。但是，您可以尝试缓慢升高温度，直到存储溶液完全融化。但膜不再完整的可能性仍然存在。 

不。Repligen生产供实验室使用的透析膜。 

只要膜是完整的，膜上的卷痕或折线就不会影响扩散性能。 

纤维素酯（CE）膜中的聚合物交联形成更为刚性的分子晶格，而再生纤维素（RC）聚合物则形成更柔韧的晶格结构。不透明是由于更为刚性的框架中的膜孔所导致的。孔径越大，膜越不透明。 

CE和RC透析膜只可以机械密封。但是，PVDF透析膜可机械密封或热密封，且出于样品“包封”目的时，通常使用热密封方式。 

我们不建议重复使用透析膜，因其可能会因操作而被污染，且透析条件（pH、温度、化学暴露等）可能会改变膜的完整性和/或引起泄漏，特别是在取下和重新夹上膜夹时。透析膜设计为一次性使用。 

由于透析膜由海绵状基质组成，因此通过评估其截留分子量（MWCO）为特征的截留性能，而间接测量其“孔径”更为合适和实用。 MWCO定义为17小时内被膜截留90％的溶质的分子量。因此，您应该选择MWCO刚好小于您要截留的溶质的大小的膜。 

Both Spectra/Por^® 2 and 4 have a MWCO of 12-14 kD. While Spectra/Por^® 4 is more suited for general dialysis, Spectra/Por^® 2 offers special higher and lower FW's and/or higher permeability; i.e. water permeability of Spectra/Por^® 2 is superior to that of Spectra/Por^® 4. 

表面积与体积之比与膜管扁平宽度有关。如果您有两段长度相等的膜管，而其扁平宽度不同，扁平宽度较小的膜管具有较高的表面积与体积之比，透析速度更快，而扁平宽度较大的膜管具有较低的表面积与体积之比，透析速度较慢。较小的扁平宽度具有较短的扩散距离，且溶质通过膜孔的竞争更低。扁平宽度较大时，分子与膜壁的距离更长，溶质通过膜孔的竞争也更高。通常，表面积与体积之比越大，透析越快。 

大多数透析是在没有跨膜渗透压的情况下进行的。透析过程由透析膜管内部和外部的浓度梯度所驱动。如果渗透压差异很大，水将流过膜。如果过多的水透过膜迁移，则透析膜管可能会破裂或塌陷，具体取决于水迁移的方向。 

透析膜不是针对压力过滤而设计的。在不影响MWCO的前提下，建议的最大压力为1.5 psi。 

生物分子必须保持在严格的pH值控制条件下才能稳定其分子特性。透析缓冲液的典型pH范围是6至8 。以下是生物分子溶液常见的一些溶液/缓冲液： 

• Water
• PBS：磷酸盐缓冲液
• TBS：Tris 缓冲盐溶液
• HEPES
• 氨基酸缓冲液

尽管溶解的分子的大小由以道尔顿为单位的分子量（MW）单位定义，但颗粒和细胞的大小由公制直径定义，因为MW单位不太实用，且没有考虑微观范围内的形状。由于微米是2维距离的量度，而道尔顿是3维尺寸的量度（基于原子量单位），因此两者之间没有从一个到另一个的直接转换方式。由于这个原因，对许多常见的生物材料都针对透析、超滤和微滤目的进行了表征，并绘制在转换图上，以关联近似比例，作为估算转换的参考。有关道尔顿和公制单位之间进行转换的信息，请参阅我们网站上的孔径对照表。 

如果可能，我们建议在低盐浓度的缓冲液中进行透析。不建议在纯去离子水中进行透析，因为这会导致渗透压将水吸入膜管，使膜管膨胀，并可能使膜破裂。使用溶质（盐）浓度逐步降低的一系列缓冲液，进行连续透析，可防止渗透压导致膜溶胀。尝试在每次更换缓冲液时，使溶质浓度的数量级之比为10：1 。例如，含有5 M NaCl的样品使用500 mM NaCl缓冲液进行透析。 

我们强烈建议不要在膜管上打绳结。绳结不能有效地防止泄漏。只有透析膜夹才能为样品的安全透析提供足够的密封。 

除了每种膜管的扁平宽度外，Repligen还列出了相关的体积/长度比，可用于计算容纳样品量所需的膜管长度。例如，如果扁平宽度为16 mm，则体积/长度比为 0.79 ml/cm。要容纳5 ml的样品，您需要大约 6.5 cm的长度。但是，您还需要增加大约10至20 ％（至少为1 cm）的长度，以留出顶部空间（空气），以使样品保持漂浮状态。最后，您还需要在两端留出足够的长度，大约2 cm，以允许使用膜夹密封。膜管总长度将至少为11.5 cm。计算所需膜管长度的简单公式如下： 

总长度=（样品体积）/（体积/长度）+（额外的10 - 20 ％）+ 4 cm